- 基因服務 - 酵母双杂交(Y2H)法筛选

酵母双杂交(Y2H)法筛选


酵母双杂交技术作为发现和研究在活细胞体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技术平台,近些年来一直得到了广泛运用。

酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的,研究活细胞内蛋白质相互作用,对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到,它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明,酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作,也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此,它在许多的研究领域中有着广泛的应用.

同以往研究蛋白质-蛋白质之间相互作用的实验手段相比,双杂交系统具有其独特优势。首先,融合体蛋白之间的相互作用是在真核酵母细胞内进行,蛋白质有可能保持天然的折叠状态,类似其在体内生理状态下的情况,这是其他离体生化检验方法所缺乏的,因此较之后者,它所证实的蛋白质间相互作用将更接近于在体的真实水平。其次,双杂交系统的敏感度极高,可以检测到在蛋白质之间结合常数低至1mmol/L左右的微弱作用。许多微弱或短暂的蛋白质之间的相互作用可以借助报道基因表达过程中的多级放大效应反映出来;融合蛋白基因在强启动子的作用下,处于较高的表达水平。第三,在筛选cDNA文库时,双杂交系统能够简捷地得到编码相互作用蛋白的基因序列,它只需构建质粒而不必准备抗体或纯化蛋白,省略了其它体外检测蛋白之间相互作用方法所必须的蛋白抽提、纯化等繁琐步骤。

我们提供特色的一条龙服务。从构建文库到最终阳性克隆的筛选,这样可提高效率,避免错误,从而为我们的客户节省客观研发费用。

我们的服务包括:

  1. 将诱饵靶基因克隆到Y2H载体中去,并测序。 这可以是短的(截切过的)或全长基因。
  2. 测试诱饵基因的自我激活能力和毒性。
  3. 文库筛选和交互验证。
  4. 阳性克隆的分离提取和DNA的测序。

您只需提供:

  1. 2μg〜5μg含诱饵靶基因的质粒, 或
  2. 该基因的DNA序列,以便我们在实验室进行人工合成(适当收费)

您能收到的:

  1. 阳性克隆若干和其DNA测序结果(最多20个克隆)
  2. 每个阳性克隆的2〜5μg质粒DNA。

周转时间:大约2个月。