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ADNc pour séquençage de prochaine génération

Bio S&T offre la meilleure qualité d'ADNc pour le séquençage 454 (FLX et Titanium) et autres applications en aval.

Notre ADNc non cloné normalisé est créé avec une technologie exclusive qui produit des molécules d’ADNc pleine longueur fractionnées selon la taille (voir Figure 1). Nous utilisons une méthode modifiée de SMART. Nous fournissons une quantité standard de 5ug mais des quantités supérieures peuvent être commandées. Un rabais est possible pour les grosses commandes.

//NOT TRANSLATED// NEW ! NGS using Illumina Hi-seq 2000 platform and downstream bioinformatics analysis are available. Please contact us for details.

Options offertes

Type de banque Source Amorces utilisées
Pleine longueur (eucaryote) ARN eucaryotique total OligodT (entrecoupés de dG pour limiter les régions homopolymères)
Extrémité 5’ seulement ARNm eucaryotique Amorces aléatoires
Extrémité 3’ seulement ARNm eucaryotique OligodT (entrecoupés de dG pour limiter les régions homopolymères, si désiré)
Pleine longueur (procaryote) ARN procaryotique total Amorces aléatoires

Figure 1 : Banque d'ADNc de plante récemment construite, utilisée pour du séquençage 454 titanium. Les bandes montrées ci-dessous sont des cDNAs clonés.

Cdna size blast

Livrables

  1. 1 ug d’ADNc non normalisé amplifié (disponible sur demande).
  2. 5 ug d’ADNc normalisé non cloné (convient au clonage directionnel).
  3. Amorces pour amplification (disponibles sur demande).

Services connexes

Option #1 : banque de cDNA cloné 

 

  • Bio S&T testera 10 clones après normalisation pour déterminer la taille des inserts (la photo du gel sera fournie).
  • 50 000 clones seront créés (ADNc insérés dans un vecteur) et livrés sous forme de stock de glycérol.
  • Des clones additionnels peuvent être fournis pour un montant supplémentaire. Veuillez mentionner le nombre de clones requis lors de la demande de soumission.

Option #2 : Regroupement (pooling) – frais additionnels  (avec achat de l’Option #1)

 

  • Les cellules clonées seront distribuées dans une plaque de 96 puits (environ 500 clones par puits).

Option #3 : Criblage – frais additionnels (avec achat de l’Option #1)

 

  • Criblage de 50 000 clones avec les amorces de PCR fournies par le client. Un clone d'ADNc positif sera donné.

Option #4 : échantillonnage de séquançage – frais additionnels 

 

  • 10 clones sélectionnés aléatoirement seront séquencés (un passage par clone). Les données seront fournies sous forme de chromatogramme et de fichier texte.

Option #5 : Plus de ug d'ADNc non cloné – frais additionnels 

 

  • Faites l’acquisition de quantités additionnelles d'ADNc non cloné.

Matériel requis

Un minimum de 1ug d'ARN total est requis (si le matériel n'est pas limitant, il est grandement préférable d'envoyer 10-100ug). L'ARN peut être isolé avec n'importe quelle procédure habituelle (le protocole à base de TRIZOL est fortement recommandé). Si le matériel est limitant, veuillez nous contacter pour obtenir notre protocole d’isolation d'ARN (fourni au client lorsqu’'ne commande est placée). Nous pouvons aussi procéder à partir de tissu ou de cellules (des frais d'isolation d’ARN s'appliquent alors).

Préparation et expédition


Veuillez précipiter l’ARN total et le laver avec de l’éthanol 80%, puis resuspendre le culot dans de l’éthanol 80%. Il est important de :

  1. Utiliser un microtube avec capuchon à vis.
  2. Remplir presqu’entièrement le tube d’éthanol 80%.
  3. Entourer le capuchon de parafilm afin d’éviter l’évaporation.

Nous recommandons que l’ARN soit expédié sur glace sèche mais si cette option n’est pas possible, veuillez envoyer le matérielà température ambiante par le service de courrier de votre choix à l’adresse suivante :

Bio S&T Inc.
Attn: Areti Karadimos
5020 Fairway Street, Suite 220
Montréal (Québec) 8T 1B8, Canada
Tél : (514) 633-6006

Nous acceptons aussi les colis sur glace sèche. Nous avons une grande expérience de l’expédition internationale échantillons de partout dans le monde.

Séquençage

Plusieurs de nos clients ont choisi d’utiliser EnGenCore, un centre de séquençage génomique qui utilise la plateforme de Roche 454. EnGenCore se trouve au Centre de recherche en santé publique de l’Université de Caroline du Sud. TPour obtenir une soumission, veuillez contacter engencore.sc.edu (1-803-777-4338).